藍耳病（PRRS）是導(dǎo)致全球養(yǎng)豬業(yè)巨大經(jīng)濟損失的重大疫病之一。由于對PRRSV以及對機體的抗病免疫機理研究不夠全面、不夠深入，由于可用于防控PRRS的工具不夠完美，在過去的二十多年里，世界范圍內(nèi)對PRRS采取的多種防控措施，都沒能收到很好的經(jīng)濟回報。隨著科技的進步，對PRRS及其病原認識的不斷深入，一些更完美、更有效的工具陸續(xù)問世，PRRS將不再是養(yǎng)豬企業(yè)最頭疼的疫病，操作更簡單的免疫凈化措施將為企業(yè)帶來更高的投資回報。
一、藍耳病免疫凈化的“雙陰”標(biāo)準(zhǔn)
PRRS免疫凈化標(biāo)準(zhǔn)是“藍耳病雙陰標(biāo)準(zhǔn)”，即抗原陰性、感染抗體陰性。抗原陰性，就是不能從組織和血液中分離到病毒顆粒，或檢測到病毒核酸（用RT-PCR檢測）；感染抗體陰性，就是病毒的核衣殼（N）蛋白抗體陰性，愛德士ELISA S/P＜0.4。
二、藍耳病自愈自凈的特點是免疫凈化的基礎(chǔ)
1、藍耳病的定義。藍耳病學(xué)名“豬繁殖與呼吸障礙綜合征”，英文名Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，簡稱PRRS。
2、PRRS的主要臨床癥狀，突出表現(xiàn)有四個方面：
1）、在母豬主要表現(xiàn)為繁殖障礙綜合征Reproductive Syndrome，特征性臨床表現(xiàn)是懷孕后期的流產(chǎn)，返情、復(fù)配、死胎、木乃伊的比例也比正常情況下的高。
2）、在生長育肥豬及成年豬主要表現(xiàn)為呼吸障礙綜合征Respiratory Syndrome，特別是在9~12周齡，感染豬的呼吸道問題明顯突出。
3）、PRRSV主要侵害免疫系統(tǒng)、破壞免疫功能，導(dǎo)致機體的免疫抑制，使感染豬并發(fā)或繼發(fā)其他病原體，如圓環(huán)病毒、豬肺炎支原體、巴士桿菌、副豬嗜血桿菌、鏈球菌等，由此，PRRSV也成為豬呼吸道疾病綜合癥（Porcine Respiratory Disease Complex, PRDC）的主要病原之一；PRRSV感染也可以導(dǎo)致其他疫苗免疫效果降低甚至免疫失敗，如對豬瘟疫苗、口蹄疫疫苗、偽狂犬疫苗等。
4）、實際上，PRRSV還可以導(dǎo)致消化道疾病如仔豬腹瀉，最近報道的類NADC-34，主要導(dǎo)致感染豬的腹瀉。
3、豬只感染PRRSV后，機體就發(fā)生了一系列的免疫學(xué)變化。
1）、有研究表明，豬只感染PRRSV后，病毒就在體內(nèi)復(fù)制，很快就能在血液中檢出病毒，病毒血癥持續(xù)時間大約1個月，組織內(nèi)病毒存續(xù)時間比在血液中要長，大約5個月；病毒感染不久機體即產(chǎn)生抗體反應(yīng)。ELISA 總抗體維持1年左右；病毒中和抗體產(chǎn)生時間比較晚，大約在感染后4周，維持時間也比較短，大約3~5個月；γ-干擾素產(chǎn)生細胞出現(xiàn)的時間比較晚，大約在感染后4周，但其維持的時間比較長，1年甚至更長。
圖1、豬只感染PRRSV后的系列免疫學(xué)變化
Temporal sequence of events after infection of a pig with PRRSV（Department of Veterinary and Biomedical Sciences South Dakota State University）
2）、此外，還有資料更詳細分析了機體感染PRRSV后5周內(nèi)發(fā)生的系列免疫學(xué)變化：感染豬血液中的病毒載量比組織中的高，病毒血癥維持5周左右，盡管在病毒感染后前4周組織內(nèi)的病毒載量比血液低，但其存續(xù)時間卻比在血液中更長，有“低載量長時間”的特點；與病毒感染同時出現(xiàn)的是NK細胞（自然殺傷性細胞），1周后達到峰值，4周后下降到正常水平；樹突細胞反應(yīng)和局部T細胞反應(yīng)在感染后2~3天出現(xiàn)，分別在感染1周和2周后達到最高水平，隨后緩慢下降；外周血T細胞反應(yīng)出現(xiàn)比較晚，大約在感染后2周多出現(xiàn)，5周后達到峰值，隨后緩慢下降；病毒中和抗體產(chǎn)生最晚，大約在感染后3周多才出現(xiàn)。
圖2、豬只感染PRRSV后的系列免疫學(xué)變化
Temporal sequence of immunobiological events after PRRSV infection in pigs（Vet Res 2020）（Salik Nazki College of Veterinary Medicine Jeonbuk National University, Iksan, South Korea）
根據(jù)“PRRSV感染后病毒血癥大約4周左右消失、組織內(nèi)的病毒大約5個月左右消失”可知，PRRS發(fā)展經(jīng)過一段時間后自己就痊愈了，也就是說，PRRS就像豬流感一樣能自愈。
當(dāng)然，個體與群體的痊愈過程所受影響因素是有差異的。個體的痊愈過程主要受感染日齡、機體的免疫力、所感染病毒毒力、以及生物安全措施的執(zhí)行情況等因素的影響，因此，發(fā)病過程短；群體的痊愈過程受影響因素較多，如群體的健康狀況、免疫力水平、所感染病毒種類及毒力、病毒的傳播速度、感染的季節(jié)、所采取的生物安全措施、群體的流動頻率以及個體之間的差異等因素的影響。因此，群體的痊愈過程更復(fù)雜、周期更慢長。
因此，免疫的目的就是提高群體的免疫力水平、縮短個體之間的差異、干預(yù)群體疫病的感染、發(fā)生發(fā)展、流行和轉(zhuǎn)歸，縮短群體疫病的流行周期，縮短群體的痊愈過程。
過去采用的PRRSV野毒馴化或者PRRS活苗免疫的方式，能夠縮短疫病流行過程，但它不是最究竟的PRRS控制凈化措施。
野毒馴化或活苗免疫的本質(zhì)也是人為干預(yù)豬群PRRS的感染、發(fā)生發(fā)展、流行和轉(zhuǎn)歸，抑制PRRS的大流行發(fā)生，減少其對生產(chǎn)的不利影響，特別是減少母豬群的流產(chǎn)風(fēng)暴。
但是，PRRS是免疫缺陷疫病，活疫苗的毒力盡管已經(jīng)降低，但它還是活病毒，還會感染免疫細胞，導(dǎo)致免疫缺陷。因此，對這種免疫缺陷疫病，野毒馴化或者活疫苗免疫不是最究竟的措施，我國二十多年的藍耳病防控實踐也證明了這一點。第一、野毒馴化或者活疫苗免疫不能徹底解決PRRS問題；第二、野毒或者疫苗毒的存在，為病毒擴散、病毒重組、毒力返強等提供機會；第三，豬是經(jīng)濟價值有限的動物，發(fā)病及發(fā)病過程稍長都影響?zhàn)B豬的經(jīng)濟效益。
4、為了提高群體對PRRS的抗病免疫水平，必須了解PRRSV的主要免疫保護相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白。從病毒結(jié)構(gòu)示意圖可以看出，核衣殼（N）蛋白位于病毒顆粒內(nèi)部，與核酸相連，病毒表面囊膜上還有基質(zhì)蛋白M，小囊膜蛋白E，多聚蛋白GP2、GP3、GP4、GP5等，還有GP5/M二聯(lián)體，GP2a/E/GP3/GP5多聯(lián)體。
5、這些病毒囊膜上的結(jié)構(gòu)蛋白與病毒侵入宿主細胞有關(guān)。多聚蛋白GP5不直接與宿主細胞的PRRSV主要受體CD163相互作用，因此，多聚蛋白GP5本身并不決定病毒對宿主細胞的取向。但GP5通過與M蛋白形成（GP5+M）二聯(lián)體，影響 GP2-GP3-GP4多蛋白復(fù)合物的構(gòu)象，間接影響病毒與宿主細胞CD163受體結(jié)合，進而影響病毒穿透細胞膜、進入細胞而引發(fā)感染。
圖3、多聚蛋白GPS與宿主細胞受體CD163間的關(guān)系
6、由于GP5+M蛋白二聯(lián)體在病毒侵入宿主細胞過程中起著重要作用，因此，找出GP5+M蛋白二聯(lián)體上的中和表位(epitope)就顯得十分關(guān)鍵。有研究表明，PRRSV主要的中和表位位于多聚蛋白GP5的外結(jié)構(gòu)域上。GP5蛋白的中和表位的最小抗原性區(qū)域，包括主要中和表位，核心的氨基酸是第39至59段。GP5蛋白由200個氨基酸組成，其表位是構(gòu)象表位；基質(zhì)白M由190個氨基酸組成，GP5與 M蛋白通過二硫鍵形成二聚體，保證了GP5上中和表位的構(gòu)象。
圖4、GP5-M蛋白上的中和表位(epitope)
7、GP5蛋白上存在誘騙表位(decoy epitope)，個別糖化氨基酸遮蔽了中和表位，使得藍耳病毒在體內(nèi)產(chǎn)生抗體弱，出現(xiàn)時間慢，容易逃避宿主的免疫清除，中和抗體在體外對病毒的中和也大打折扣，不能真實反應(yīng)中和抗體的滴度和在體內(nèi)的實際作用。
8、與PRRS免疫凈化相關(guān)的主要有兩種重要抗體：GP5+M蛋白抗體；核衣殼（N）蛋白抗體。
有研究表明，GP5+M蛋白在病毒侵入宿主細胞時發(fā)揮重要作用，GP5+M蛋白抗體可抑制病毒感染細胞，具有病毒中和作用，也稱病毒中和抗體。病毒侵入機體，在其繁殖過程中產(chǎn)生大量GP5+M蛋白，由于多聚糖屏蔽作用，感染早期幾乎很少誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，但1個月后也能誘導(dǎo)高水平的GP5+M蛋白抗體；普通滅活疫苗，囊膜上的GP5+M蛋白的抗原表位被多聚糖屏蔽，沒有暴露，不產(chǎn)生中和抗體。GP5+M蛋白抗體可用HIPRA試劑盒檢測 IRPC值，判斷中和抗體水平高低。
核衣殼（N）蛋白位于病毒顆粒內(nèi)部，與核酸相連。活病毒侵入后，在宿主細胞內(nèi)大量繁殖，病毒核酸也大量復(fù)制，同時生產(chǎn)大量核衣殼（N）蛋白，進而誘導(dǎo)機體產(chǎn)生高水平核衣殼（N）蛋白抗體。滅活病毒不感染宿主細胞、不繁殖、核酸不復(fù)制，因此，核衣殼（N）蛋白含量極低，幾乎不能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生核衣殼（N）蛋白抗體，即便能產(chǎn)生，其水平也極低、消失也很快。因此，核衣殼（N）蛋白抗體，又稱感染抗體，可用IDEXX ELISA 試劑盒檢測其S/P值，根據(jù)比值大小判斷感染與否或感染輕重。當(dāng)S/P≥2.0的樣本數(shù)超過10%時，表明豬群PRRS活躍；2.0>S/P≥0.4，表明豬群PRRS陽性穩(wěn)定；S/P＜ 0.4，表明豬群PRRS陰性。
PRRS滅活疫苗免疫效果實驗室檢測的情形與檢測PRV基因缺失疫苗的情形相似，PRRSV的核衣殼（N）蛋白抗體類似于PRV的gE/gI抗體，用于判斷是否有活（野）毒感染；PRRSV的GP5+M蛋白抗體類似于PRV的gB抗體，用于判斷免疫保護水平高低。
三、為免疫凈化藍耳病而設(shè)計的藍泰萊
加速PRRS的痊愈過程是藍泰萊研發(fā)的技術(shù)路線。要達到加速痊愈過程的目的，就必須清除感染豬體內(nèi)的病毒；要清除體內(nèi)的病毒，就必須有超強的細胞免疫力，以清除被病毒感染的細胞和細胞內(nèi)的病毒，還必須有超強的體液免疫力，以清除細胞外的病毒；要實現(xiàn)超強的細胞免疫力和體液免疫力，疫苗的有效抗原含量就必須很高，此外,還必須有“雙促進”作用的疫苗佐劑。為了提高疫苗的有效抗原含量，一方面要對種毒進行克隆、對細胞進行改造、篩選最優(yōu)培養(yǎng)基，以提高制苗病毒的滴度，另一方面，要充分暴露病毒顆粒上的淋巴細胞識別位點即抗原位點，以提高病毒的抗原性，二者缺一不可（見圖5）。
圖5、藍泰萊研發(fā)技術(shù)路線
四、藍泰萊更是匠心打造出來的
藍泰萊的研發(fā)技術(shù)路線確定后，按技術(shù)路線，反復(fù)打磨產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的每一細節(jié)，也很重要。
通過無數(shù)次病毒克隆試驗，篩選出了高產(chǎn)制苗病毒、高產(chǎn)培養(yǎng)細胞、高產(chǎn)培養(yǎng)基，篩選出了能充分暴露抗原位點提高抗原性（antigenicity）的病毒滅活劑及滅活工藝，篩選出了能同時促進細胞免疫和體液免疫的“雙促進”疫苗佐劑，以及疫苗組方和疫苗乳化工藝。
前面已經(jīng)講到，PRRS野毒和活疫苗病毒在細胞內(nèi)能不斷繁殖，病毒核酸不斷復(fù)制、核衣殼（N）蛋白不斷增加，其誘導(dǎo)的N蛋白抗體水平也很高；而滅活疫苗中的病毒是死的，不能繁殖、核酸不能復(fù)制，因而不產(chǎn)生N蛋白，滅活疫苗中的N蛋白含量也很低，幾乎不能誘導(dǎo)產(chǎn)生N蛋白抗體。由此可以建立，通過比較N蛋白抗體 S/P比值的高低，來區(qū)分滅活疫苗免疫與野毒感染的鑒別方法及免疫效果的評估方法。
五、藍泰萊具有無以倫比的優(yōu)勢
通過無數(shù)次試驗，藍泰萊的制苗病毒，滅活前滴度達到 TCID50108.5 的世界先進水平；篩選出來的特殊滅活劑及滅活工藝，能讓制苗病毒表面的抗原表位得到充分暴露，使疫苗的抗原性（antigenicity）更強；篩選出來的疫苗佐劑，也能真正實現(xiàn)細胞免疫和體液免疫 “雙促進”的作用，大大提升了藍泰萊誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫保護力；利用已有的實驗室檢測手段建立起來的，區(qū)分滅活疫苗免疫與活疫苗（野毒）感染的鑒別方法以及免疫效果的評估方法，在實驗室和臨床實踐中都得到了充分驗證；PRRSV感染豬免疫藍泰萊后，真正達到了重整被PRRSV破壞的免疫系統(tǒng)，同時增強免疫豬的細胞免疫力和體液免疫力，高效清除體內(nèi)PRRSV的目的，真正滿足了豬場“緊急免疫治療、預(yù)防控制、免疫凈化”等功能全面覆蓋的要求。
1）、藍泰萊幾乎不誘導(dǎo)免疫抑制因子（IL-10,TGF-β）產(chǎn)生
與進口活疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平免疫抑制因子相反，藍泰萊分別在注射6小時、和24小時后幾乎不誘導(dǎo)免疫抑制因子（IL-10,TGF-β）的產(chǎn)生，說明免疫藍泰萊不會產(chǎn)生免疫抑制（見圖6）。
圖6、藍泰萊與進口活疫苗免疫后誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫抑制因子濃度對比
2）、藍泰萊同時誘導(dǎo)高水平細胞免疫力和體液免疫力
與普通滅活疫苗相比，藍泰萊免疫后，不同時間段的細胞因子的表達量更高，說明藍泰萊的細胞免疫力更強（見圖7）。
圖7、藍泰萊與普通藍耳滅活疫苗誘導(dǎo)的細胞因子相對表達量
體液免疫力可以粗略地用中和抗體水平（IRPC值）表示，普通藍耳病滅活疫苗，無論是首次免疫還是加強免疫都不誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體；而藍泰萊，在首次免疫14天后就能產(chǎn)生較高水平的中和抗體，二免后中和抗體水平再次拉升，完全
符合疫苗免疫應(yīng)答規(guī)律，說明藍泰萊的體液免疫力更強（見圖8）。
圖8、藍泰萊與普通藍耳滅活疫苗誘導(dǎo)的中和抗體水平比較（海博萊試劑盒IRPC值）
3）、藍泰萊可以高效清除攻毒豬血清中的藍耳病毒
相隔21天，兩次藍泰萊免疫，二免28天后，用PRRSV對免疫豬進行攻毒，攻毒后，連續(xù)多次檢測攻毒豬血清中的病毒載量，結(jié)果，攻毒14天后就不能在血清中檢出病毒核酸，表明藍泰萊可以高效清除攻毒豬血清中的病毒（見圖9）。
圖9、藍泰萊免疫豬藍耳病毒攻毒后血清中的病毒載量變化
表1、藍泰萊免疫PRRS雙陰母豬能產(chǎn)生良好的中和抗體
表2、藍泰萊免疫PRRSV陽性母豬感染抗體逐漸轉(zhuǎn)陰
六、用藍泰萊免疫凈化操作更簡單
有了藍泰萊這一好工具，藍耳病的免疫凈化工作就來的相當(dāng)簡便，可以說是簡單粗暴。
1、全場全面停止使用所有PRRS減毒活疫苗。
2、做好生物安全工作，特別要做好種精的病原檢測工作，盡量減少引種次數(shù)、降低引種頻率，如確實需要從外部引種豬，引進的種豬必須在隔離場或隔離欄舍隔離飼養(yǎng)觀察。
3、對飼養(yǎng)在隔離場的引進種豬，應(yīng)分別在第1天、第21天進行兩次藍泰萊免疫。種豬在第二次免疫后4周，經(jīng)檢測達到“藍耳雙陰”標(biāo)準(zhǔn)后方可與本場其他種豬混群飼養(yǎng)。
4、對種公豬、種母豬，建議集中統(tǒng)一免疫，即第1天、第21天兩次免疫，以后每隔3個月重復(fù)免疫，每次每頭豬肌肉注射2.0毫升。
5、對仔豬和小豬，要分兩種情況。對藍耳陰性豬場或陽性穩(wěn)定豬場，建議在35日齡，和65日齡，進行兩次免疫接種，每次每頭豬肌肉注射1.0毫升，這種免疫模式簡稱“365模式”；對藍耳陽性活躍豬場或者發(fā)病豬場，建議在15日齡、35日齡、和65日齡，進行三次免疫接種，每次每頭豬肌肉注射1.0毫升，這種免疫模式簡稱“1365模式”。
七、免疫凈化效果評估方法公平公正
藍泰萊的免疫效果首先表現(xiàn)在生產(chǎn)成績的極大改善。藍泰萊免疫一段時間后，豬場不再出現(xiàn)PRRS各種臨床癥狀和解剖病變，其他細菌性感染，如豬肺疫、副豬嗜血桿菌感染、鏈球菌感染等都少了，豬氣喘病也少見了，隨之而來的，用于治療或預(yù)防各種細菌感染的各種藥品費用也明顯減少、飼料消耗也明顯降低，各項生產(chǎn)指標(biāo)也得到大大改善，商品豬上市時間也大大縮短。
藍泰萊的免疫效果還可以進行實驗室檢測。藍泰萊免疫一段時間后，實驗室檢測各項指標(biāo)，包括PRRS“雙陰指標(biāo)”都必須符合要求：血清中的病毒載量逐漸下降直至不能檢出，可用RT-PCR檢測；血清中的感染抗體水平逐漸下降直至轉(zhuǎn)陰，可用IDEXX ELISA試劑盒檢測N蛋白抗體S/P值；血清中的病毒中和抗體（GP5+M蛋白抗體）水平保持在一個合理區(qū)間，如IRPC值100~300，可用HYPRA試劑盒檢測；反映細胞免疫力水平的CD4+T細胞，CD8+T細胞和γ-干擾素的表達量，都明顯提高，可以用流式細胞儀檢測。
要注意的是，在進行血清學(xué)檢測時，必須連續(xù)多次采樣檢測，然后再對前后多次的檢測結(jié)構(gòu)進行對比分析。
八、藍泰萊免疫凈化的投資回報更高
藍泰萊免疫凈化的投資回報體現(xiàn)在如下5個方面：
1、安全系數(shù)高：不像減毒活疫苗存在疫苗毒致病的風(fēng)險，存在散毒、毒力返強、與其他毒株雜交重組的風(fēng)險；藍泰萊沒有活病毒、沒有散毒、返強、雜交重組的風(fēng)險。
2、無轉(zhuǎn)陽風(fēng)險：免疫凈化獲得的“藍耳雙陰”豬群，由于有免疫保護力，因此，不會像“閉群凈化”獲得的“藍耳雙陰”豬群一樣存在“陰轉(zhuǎn)陽”可能性，導(dǎo)致豬群生產(chǎn)成績波動較大、母豬群出現(xiàn)流產(chǎn)風(fēng)暴的風(fēng)險。
3、凈化周期短：與“閉群凈化”相比，免疫凈化達到凈化的時間更短，在一個生物安全措施執(zhí)行得比較好、豬群流動也有效控制的前提下，實現(xiàn)藍耳病凈化的目標(biāo)大約需要12個月左右。
4、各種耗資少：與“閉群凈化”相比，免疫凈化不用反復(fù)全群采樣檢測，不用大量淘汰陽性豬只，相應(yīng)地它所需要的各種費用也比就少。
5、生產(chǎn)成績最好：“藍耳雙陰”豬群，由于沒有了藍耳病及其繼發(fā)感染的影響、沒有了免疫抑制，優(yōu)良種豬生產(chǎn)性能得到了充分發(fā)揮，大大減少了飼料消耗，縮短了生產(chǎn)周期。
藍泰萊自2021年9月上市以來，已有219家大型、特大型養(yǎng)豬場在使用。它們代表了不同的地區(qū)、感染不同的毒株如經(jīng)典毒、變異毒、包括新出現(xiàn)的類NADC-30/34、以及采用不同處理措施的各種情形。這些豬場換成藍泰萊后，在緊急免疫治療、預(yù)防控制和免疫凈化PRRS上都取得了驚人的成績，明顯優(yōu)于其他同類產(chǎn)品，可以說是出類拔萃。養(yǎng)豬企業(yè)也因此獲得更高、更直接的投資回報。
手機閱讀
手機掃碼可移動閱讀本文。打開微信，點擊底部的“發(fā)現(xiàn)”，使用“掃一掃”即可打開網(wǎng)頁，右上角分享至朋友圈。